導(dǎo)讀：近幾年，MSI在指南共識(shí)中的推薦地位不斷上升，MSI檢測(cè)結(jié)果在指導(dǎo)免疫治療上有很強(qiáng)的特異性。因此，獲取更準(zhǔn)確的MSI狀態(tài)與患者獲益息息相關(guān)，有研究表明不同位點(diǎn)在中國(guó)人群中MSI檢出率不同，指南推薦的位點(diǎn)（2B3D NCI Panel）檢出率比沒(méi)有指南推薦的位點(diǎn)（6個(gè)單核苷酸位點(diǎn)）檢出率高一倍（13.5% VS 6.31%）。本文中，劉東戈教授將為大家溯源為何2B3D是CSCO指南推薦的具有重要意義的MSI檢測(cè)位點(diǎn)：

微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（Microsatellite instability，MSI）現(xiàn)已成為非常重要的泛癌種標(biāo)志物，美國(guó)癌癥研究中心不分腫瘤發(fā)生部位，將所有高度微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI-H）的腫瘤定義為MSI-H腫瘤，相比MSS或MSI-L腫瘤，MSI-H腫瘤能夠從免疫治療中顯著獲益。因此，MSI現(xiàn)在最重要的臨床意義就是指導(dǎo)泛癌種實(shí)體瘤免疫治療。除此之外，MSI檢測(cè)不僅是篩查林奇綜合征的重要手段，其檢測(cè)結(jié)果還能預(yù)測(cè)胃腸腫瘤預(yù)后，指導(dǎo)術(shù)后化療方案制定。

基于MSI的重要臨床檢測(cè)意義，中國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)發(fā)布的CSCO腫瘤診療指南中，多個(gè)癌種指南都強(qiáng)烈推薦MSI檢測(cè)，包括CSCO結(jié)直腸癌診療指南（I級(jí)推薦）、CSCO胰腺癌診療指南（I級(jí)推薦）、CSCO胃癌診療指南（I級(jí)推薦）、CSCO食管癌診療指南（I級(jí)推薦）、CSCO卵巢癌診療指南（III級(jí)推薦）、CSCO膽道惡性腫瘤診療指南（III級(jí)推薦）、CSCO前列腺癌診療指南。

而針對(duì)MSI的檢測(cè)，CSCO指南唯一推薦的檢測(cè)Panel，即由2個(gè)單核苷酸位點(diǎn)和3個(gè)雙核苷酸位點(diǎn)組成的2B3D NCI Panel（BAT-25、BAT-26、D2S123、D17S250、D5S346），并給出了判定標(biāo)準(zhǔn)：5個(gè)位點(diǎn)中2個(gè)及2個(gè)以上的位點(diǎn)不穩(wěn)定為MSI-H；1個(gè)位點(diǎn)不穩(wěn)定為MSI-L；所有位點(diǎn)均穩(wěn)定為MSS。

圖 1 CSCO指南唯一推薦2B3D NCI Panel作為MSI檢測(cè)Panel

人類基因組中已知的微衛(wèi)星位點(diǎn)數(shù)目多達(dá)1900多萬(wàn)個(gè)[1]，由于前人的不斷篩選和驗(yàn)證，最終2B3D NCI Panel成為CSCO指南唯一推薦的MSI位點(diǎn)。最早微衛(wèi)星不穩(wěn)定這種現(xiàn)象是在遺傳性非息肉性結(jié)直腸癌（HNPCC，即林奇綜合征）中被發(fā)現(xiàn)，當(dāng)時(shí)Aaltonen教授團(tuán)隊(duì)在HNPCC和散發(fā)性結(jié)直腸癌的腫瘤組織中都發(fā)現(xiàn)一些雙核苷酸重復(fù)的微衛(wèi)星位點(diǎn)長(zhǎng)度發(fā)生了變化，當(dāng)時(shí)定義為復(fù)制錯(cuò)誤（Replication Errors，RER）也就是后來(lái)的MSI，并且研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)在HNPCC中這種現(xiàn)象的占比高達(dá)86%[2]。同一時(shí)期，Thibodeau教授團(tuán)隊(duì)研究發(fā)現(xiàn)MSI多發(fā)于近端結(jié)腸且與患者生存期延長(zhǎng)呈顯著相關(guān)[3]。

圖 2 HNPCC與散發(fā)性結(jié)直腸癌中均發(fā)現(xiàn)RER現(xiàn)象（2）

正因?yàn)镸SI與HNPCC有非常大的相關(guān)性，MSI在早期也被用于篩查HNPCC，美國(guó)癌癥研究中心（NCI）成立的針對(duì)微衛(wèi)星不穩(wěn)定檢測(cè)的國(guó)際工作小組在1997年底舉辦了國(guó)際研討會(huì)來(lái)總結(jié)和統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。研討會(huì)將RER、MSI、MMP（microsatellite mutation phenotype）等描述微衛(wèi)星不穩(wěn)定現(xiàn)象的術(shù)語(yǔ)統(tǒng)稱為了MSI，并再次明確MSI的定義：即相比正常細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞中的微衛(wèi)星位點(diǎn)的重復(fù)單元數(shù)目改變導(dǎo)致的DNA長(zhǎng)度變化。

除此之外，研討會(huì)通過(guò)回顧總結(jié)大量既往針對(duì)MSI檢測(cè)位點(diǎn)檢測(cè)性能評(píng)估的研究，最終，統(tǒng)一了以PCR方法檢測(cè)2B3D 這5個(gè)最具代表性位點(diǎn)的方式來(lái)完成MSI檢測(cè)并明確了判讀標(biāo)準(zhǔn)，最終形成了第一個(gè)針對(duì)MSI檢測(cè)的國(guó)際共識(shí)指南——NCI 指南（Bethesda指南）[4]，這也是2B3D NCI Panel的誕生。

圖 3 1997年2B3D NCI Panel的提出與診斷標(biāo)準(zhǔn)制定（4）

2B3D NCI Panel被提出后得到了廣泛推廣和認(rèn)可。同時(shí)，隨著研究者們不斷累積研究數(shù)據(jù)，人們對(duì)MSI的了解也更加深入。法國(guó)人類多態(tài)性研究中心發(fā)現(xiàn)，基于高加索人群和非洲人群數(shù)據(jù)，單核苷酸位點(diǎn)的MSI檢測(cè)靈敏度略高于雙核苷酸位點(diǎn)，并且采用單純由5個(gè)單核苷酸位點(diǎn)（BAT25、BAT26、NR21、NR22、NR24）組成的Pentaplex Panel同樣能夠勝任MSI檢測(cè)[5]。但值得注意的是，位點(diǎn)的檢測(cè)特異性在不同人群中是不一樣的，這個(gè)研究中的數(shù)據(jù)就明確顯示這5個(gè)單個(gè)苷酸位點(diǎn)在高加索人中的特異性更高，非洲人群中特異性更低，這預(yù)示著不同種族的最適檢測(cè)Panel可能會(huì)不一樣。

圖 4 Pentaplex Panel單苷酸位點(diǎn)數(shù)據(jù)顯示不同人群的檢測(cè)特異性存在差（5）

而后，美國(guó)Promega公司將Pentaplex Panel中的NR22位點(diǎn)替換成MONO27，組成了適合歐美人群的5個(gè)單核苷酸位點(diǎn)MSI檢測(cè)Panel——Promega Panel，并加以推廣。因此，2B3D NCI Panel和Promega Panel逐漸成為MSI檢測(cè)的主流，廣泛被國(guó)內(nèi)外眾多研究者使用，是NCCN指南和其他共識(shí)中推薦的兩個(gè)檢測(cè)Panel。同時(shí)，眾多免疫檢查點(diǎn)抑制劑的大型臨床試驗(yàn)也都采用這兩個(gè)Panel對(duì)MSI進(jìn)行檢測(cè)。

而2B3D NCI Panel從眾多檢測(cè)Panel中脫穎而出成為CSCO指南推薦的檢測(cè)位點(diǎn)是有原因的。首先2B3D NCI Panel從被提出以來(lái)至今，仍被眾多國(guó)內(nèi)外指南共識(shí)所推薦，可見(jiàn)其穩(wěn)定性和可靠性；其次，前文研究結(jié)論已經(jīng)證實(shí)，不同檢測(cè)位點(diǎn)對(duì)不同人群的檢測(cè)特異性是不一樣的，所以，檢測(cè)性能也會(huì)有差異。有大量基于中國(guó)人群不同位點(diǎn)的檢測(cè)數(shù)據(jù)顯示，2B3D NCI Panel在中國(guó)人群中的檢測(cè)性能最高，其次是Promega Panel[1, 6-7]。

表 1 國(guó)內(nèi)既往MSI-H檢出率與檢測(cè)位點(diǎn)報(bào)道匯總

綜上所述，國(guó)內(nèi)權(quán)威CSCO臨床診療指南推薦2B3D NCI Panel作為MSI的檢測(cè)位點(diǎn)，不僅因?yàn)?B3D NCI Panel是穩(wěn)定可靠的MSI檢測(cè)試劑盒，并且與歐美人群相比可能不同的是，2B3D NCI Panel在中國(guó)人群中檢出率更高，可達(dá)到13.5%。

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